Desselberger, L. Разработанный комплекс ПЦР тест-систем апробирован на пробах биоматериала образцы различных тканей и органы от КРС с LSD, зараженного в естественных условиях на территории Российской Федерации в годах 21 см. Spread rate of lumpy skin disease in the Balkans, Для проверки специфичности метода использовали материал, содержащий ДНК гетерологичных вирусов вирус чумы мелких жвачных, вирус везикулярного стоматита, вирус эктимы овец, вирус оспы коров. Вы точно человек? Для оценки вариабельности значений порогового цикла один образец тестировали 3 раза в 5-кратной повторности 1 запуск — 5 повторений на протяжении 3 сут. Tropical Animal Health and Production , , 49 3 : doi: Sameea Yousefi P. Alkhamis M. Согласно данным литературы, самым распространенным путем передачи инфекции считается заражение через укусы кровососущих насекомых 11 , 12 и клещей 13 , 14 , однако однозначно вектор пока не установлен. Transboundary and Emerging Diseases , , 65 6 : doi: Поэтому необходим комплекс методов для выявления и дифференциации возбудителей каприпоксвирусных инфекции, в том числе идентификации вакцинного штамма Neethling, который также способен вызывать клинические проявления болезни у животных 23 ,
In this paper we report the development of a set of one-run real-time PCR assays to detect and differentiate between Capripoxvirus genome, field and vaccine LSD. PDF | On May 1, , A.V. Sprygin and others published ONE-RUN REAL TIME PCR ASSAYS FOR THE DETECTION OF CAPRIPOXVIRUSES, FIELD ISOLATES AND VACCINE.
The cattle and sheep industry is economically important for sustainable growth. Tropical Animal Health and Production , , 49 1 : doi: До года территория Российской Федерации была благополучна по ЗУД, однако из-за локальных конфликтов на Ближнем Востоке и изменений климата заболевание распространяется в северном направлении масштабные вспышки LSD в Турции, странах Балканского полуострова, ЕС и в России. М, Зиняков Н. Tuppurainen E. Tasioudi K.
Coetzer, R. Agianniotaki E. Эти тест-системы успешно валидированы с использованием большого числа проб, отобранных как при вспышках заболевания, так и от экспериментально зараженных животных. Необходимо отметить, что при отборе проб в случае подозрения на LSD должны учитываться и клинически здоровые животные, поскольку они могут быть скрытыми носителями вируса без видимых симптомов Chihota C. Elsevier Academic Press, San Diego, Alkhamis M. Lumpy skin disease in cattle: frequency of occurrence in a dairy farm and a preliminary assessment of its possible impact on Egyptian buffaloes. Spread rate of lumpy skin disease in the Balkans, Полученные при этом результаты подтверждены секвенированием и выделением вируса в культуре клеток данные не представлены. Более того, высокая диагностическая чувствительность и специфичность при тестировании с панелью ДНК гомологичных и гетерологичных вирусов делает этот комплекс незаменимым в постановке диагноза при работе с пробами полевого материала. На основе коэффициента угла наклона, полученного при построения графика линейной регрессии см. Moreover, diagnostic tools should detect both LSDV genome in the face of the use of live vaccine LSD virus strains and distinguish between the two. However, the increasing demand for livestock products drives animal population growth and risks for infection diseases.
Важно отметить, что пробы от животных поступали в период начала развития клинических признаков, что могло сказаться на результативности выявления вируса LSD. Для статистической верификации полученных результатов и построения линейной регрессии провели три повторных эксперимента с кратными разведениями геномной ДНК. Более того, S. В годах вспышки начали регистрировать в Приволжском федеральном округе вблизи от государственной границы Российской Федерации Диагностическую чувствительность ДЧ и диагностическую специфичность ДС тест-систем проверяли на пробах крови и назальных смывах, которые получали от естественно зараженных животных. Все локусы для амплификации и сайты отжига зондов выбирались по критериям консервативности по всем изолятам, данные по которым доступны в GenBank и уникальности для обеспечения высокой специфичности см.
Согласно данным литературы, самым распространенным путем передачи инфекции считается заражение через укусы кровососущих насекомых 11 , 12 и клещей 13 , 14 , однако однозначно вектор пока не установлен. Апробацию тест-систем проводили на панели из проб биологического материала, собранного при вспышках каприпоксвирусных инфекций в России, — стабилизированной крови, сыворотки крови, соскобов кожи нодулы , назальных и окулярных смывов, молока, тканей лимфатических узлов, легких, трахеи, селезенки и абортплодов, отобранных от животных, инфицированных в естественных условиях. Lumpy skin disease in Jordan: disease emergence, clinical signs, complications and preliminary-associated economic losses. Tulman E. Transboundary and Emerging Diseases , , 64 6 : doi: С учетом беспрецедентного распространения вируса LSD, в том числе субклинического переболевания 25 , 26 , требуются высокочувствительные методы диагностики, позволяющие проводить мониторинг среди латентно инфицированных восприимчивых животных для быстрого выявления генома возбудителя, борьбы с инфекций и предотвращения ее распространения. Диагностическую чувствительность ДЧ и диагностическую специфичность ДС тест-систем проверяли на пробах крови и назальных смывах, которые получали от естественно зараженных животных. Е, Шумилова И.
При оценке воспроизводимости результатов для шести последовательных кратных разведений стандартное отклонение SD варьировало от 0,12 до 0, Ball eds. In: Virus taxonomy: classification and nomenclature of viruses. В результате при тестирования диагностической системы с ДНК каждого вируса по отдельности, а также со смесью ДНК нескольких вирусов ложноположительных результатов мы не выявили. В, Кононов А. Epidemiology and Infection , , 1 : Frontiers in Microbiology , , 7: doi: Agianniotaki E. Onderstepoort Journal of Veterinary Research ,, 84 1 : e1-e6 doi: Для амплификации фрагмента генома вакцинных штаммов использовали участок ORF, в котором присутствуют уникальные замены, характерные только для таких штаммов, для каприпоксвирусов — участок гена P32 , консервативный для всех представителей рода Capripoxv irus. Для вариантов ПЦР-РВ в литературе представлены работы по выявлению генома каприпоксвирусов 30 , полевых изолятов 31 , вакцинного и полевого штамма в формате дуплекс Duplex PCR, одновременное выявление двух генов-мишеней
При этом следует отметить, что биологические и эпизоотологические свойства LSDV изучены недостаточно и требуют более глубокого понимания. Исследовали проб биологического материала от животных с клиническими признаками заболевания: стабилизированную кровь, сыворотку крови, соскобы кожи нодулы , назальные и окулярные смывы, молоко, ткани лимфатических узлов, легкого, трахеи, селезенки, а также абортированные плоды. В этом сообщении впервые представлен разработанный комплекс тест-систем ПЦР-РВ, позволяющих одновременно выявлять геномы каприпоксвирусов, полевых изолятов вируса LSD и вакцинного штамма Neethling. С учетом беспрецедентного распространения вируса LSD, в том числе субклинического переболевания 25 , 26 , требуются высокочувствительные методы диагностики, позволяющие проводить мониторинг среди латентно инфицированных восприимчивых животных для быстрого выявления генома возбудителя, борьбы с инфекций и предотвращения ее распространения. Необходимо отметить, что при отборе проб в случае подозрения на LSD должны учитываться и клинически здоровые животные, поскольку они могут быть скрытыми носителями вируса без видимых симптомов Transboundary and Emerging Diseases , , 64 3 : doi: Epizootology and molecular diagnosis of lumpy skin disease among livestock in Azerbaijan.
Lumpy skin disease in southern Africa: a review of the disease and aspects of control. Олигонуклеотидные праймеры и флуоресцентно-меченый зонд, способ и тест-система ПЦР в режиме реального времени для выявления генома каприпоксвирусов. Это может свидетельствовать либо о нелегальном использовании запрещенной к ввозу в Россию аттенуированной живой вакцины типа Neethling, либо о естественном распространении вакцинного Neethling. Целью исследования была разработка комплекса методов ПЦР в режиме реального времени, позволяющих выявлять геномы и дифференцировать всех представителей рода Capripoxvirus , полевые изоляты вируса LSD и вакцинный штамм типа Neethling в различных биоматериалах. Elsevier Academic Press, San Diego, Journal of Virological Methods , , doi: Zeynalova S.
Onderstepoort Journal of Veterinary Research ,, 84 1 : e1-e6 doi: Lubinga J. Carn V. Поэтому необходим комплекс методов для выявления и дифференциации возбудителей каприпоксвирусных инфекции, в том числе идентификации вакцинного штамма Neethling, который также способен вызывать клинические проявления болезни у животных 23 , Prior to the territory of the Russian Federation was free of lumpy skin disease, whereas by Turkey, Serbia, Greece, Azerbaijan have reported incursions of this virus. Бирюченкова М. Detection of lumpy skin disease virus in skin lesions, blood, nasal swabs and milk following preventive vaccination. Tropical Animal Health and Production, , 20 1 :
Колебания величины Ct при измерении показателей иллюстрирует таблица 4. Например, отсутствие генома вируса в большинстве проб смывов, в сыворотке крови и в цельной крови, вероятно, объясняется тем, что вирус еще не успел накопиться в достаточной количестве, чтобы при экскреции в биологические жидкости его концентрация превышала предел чувствительности тест-системы. Все результаты, полученные с помощью предложенных нами тест-систем, подтверждены выделением вируса в чувствительной культуре клеток данные не представлены , что свидетельствует о надежности используемых методов ПЦР-РВ при дифференциации вакцинного штамма и полевого изолята. Zeynalova S. Интенсификация животноводства неизбежно повышает риски заноса и распространения инфекционных заболеваний, из которых наиболее опасны трансграничные. The cattle and sheep industry is economically important for sustainable growth.
Примененные нами праймеры и зонды кратко охарактеризованы в таблице 1. Mercier A. Полученные при этом результаты подтверждены секвенированием и выделением вируса в культуре клеток данные не представлены. Эти свойства, возможно, объясняют слабую трансмиссию вируса между животными при отсутствия лёта переносчиков. Transboundary and Emerging Diseases , , 62 5 : doi: Для того чтобы признать какие-либо методы универсальными, необходимо провести кросс-валидацию с включением всех штаммов, детектированных к настоящему времени в мире. Это может свидетельствовать либо о нелегальном использовании запрещенной к ввозу в Россию аттенуированной живой вакцины типа Neethling, либо о естественном распространении вакцинного Neethling. Transboundary and Emerging Diseases , , 63 3 : doi: The set of PCRs was validated against a panel of samples collected in the field, including whole blood, serum, skin lesions, nasal and ocular discharge, milk, lymph nodes, lungs, trachea, spleen and aborted calves. Ветеринария сегодня , , 4 15 : Fauquet, M. An investigation of possible routes of transmission of lumpy skin disease virus Neethling.
Genome of lumpy skin disease virus. Oxford University Press, Cape Town, Ранее широко использовался классический метод D. Единственным способом борьбы с каприпоксвирусами считается вакцинация, а в случае с LSD — вакцинация гетерологичными и гомологичными аттенуированной вакцинами Ticks and Tick-borne Diseases , , 6 2 : doi: Tasioudi K.
Спрыгин А. Гетерологичная вакцина на основе вируса оспы овец безопасна для КРС, тогда как живые аттенуированные вакцины, например Lumpyvax ЮАР и аналогичные ей, при введении животным могут вызывать проявление клинических признаков заболевания Tuppurainen E. Emergence of lumpy skin disease in Greece, Инфекции крупного рогатого скота, вызываемые каприпоксвирусами, в частности вирусом заразного узелкового дерматита ЗУД, Lumpy skin disease, LSD , поражают крупный и мелкий рогатый скоту, нанося существенный экономический ущерб. Babiuk S. Agianniotaki E. Это может свидетельствовать либо о нелегальном использовании запрещенной к ввозу в Россию аттенуированной живой вакцины типа Neethling, либо о естественном распространении вакцинного Neethling. Например, отсутствие генома вируса в большинстве проб смывов, в сыворотке крови и в цельной крови, вероятно, объясняется тем, что вирус еще не успел накопиться в достаточной количестве, чтобы при экскреции в биологические жидкости его концентрация превышала предел чувствительности тест-системы. Babiuk с соавт.
Keywords: lumpy skin disease, vaccine, diagnostics, real-time PCR, genome, virus. Long-term changes in the spatial distribution of lumpy skin disease hotspots in Zimbabwe. Transboundary and Emerging Diseases , , 65 6 : doi: Biometrics , , 45 1 : doi: Journal of Virological Methods ,, 2 : doi: However, the increasing demand for livestock products drives animal population growth and risks for infection diseases. The assays proved highly sensitive and specific. Lin L. Determination of lumpy skin disease virus in bovine meat and offal products following experimental infection. М, Зиняков Н.
Заразный узелковый дерматит (нодулярный дерматит, НД, бугорчатка, nodular dermatitis, lumpy skin disease, LSD) представляет серьезную угрозу скотоводству. УДК (28). ББК Г Разнообразие, распределение и обилие гидробионтов в водохранилищах Волжско-Камского бассейна / [отв. ред. Ю. В. Герасимов].
Полученные при этом результаты подтверждены секвенированием и выделением вируса в культуре клеток данные не представлены. Spatial and temporal epidemiology of lumpy skin disease in the Middle East, Carn V. Целью исследования была разработка комплекса методов ПЦР в режиме реального времени, позволяющих выявлять геномы и дифференцировать всех представителей рода Capripoxvirus , полевые изоляты вируса LSD и вакцинный штамм типа Neethling в различных биоматериалах. Для оценки специфичности тест-системы ПЦР-РВ протестировали с генетическим материалом гомологичных и гетерологичных вирусов.
Вирусы заразного узелкового дерматита и оспы овец представляют серьезную угрозу животноводству всех стран, включая Российскую Федерацию Given this scenario, timely detection of these pathogens is key towards successful control and eradication. Штаммы и изоляты вирусов, использованные в исследовании. Tropical Animal Health and Production , , 49 1 : doi: Acta Veterinaria Belgrade ,, 66 4 : doi: В годах вспышки начали регистрировать в Приволжском федеральном округе вблизи от государственной границы Российской Федерации Prior to the territory of the Russian Federation was free of lumpy skin disease, whereas by Turkey, Serbia, Greece, Azerbaijan have reported incursions of this virus. Lubinga J.
Keywords: lumpy skin disease, vaccine, diagnostics, real-time PCR, genome, virus. В нашем исследовании тест-системы работают независимо в разных пробирках в отличие от дуплекса, где из-за одновременного присутствия обоих вирусов чувствительность реакции снижается. Таким образом, нами разработаны надежные тест-системы ПЦР-РВ для однорежимного тестирования проб на наличие генома каприпоксвирусов, полевых изолятов вируса заразного узелкового дерматита и вакцинного штамма LSDV. The assay for field LSD virus targets the 27 bp deletion in ORF, the assay for vaccine LSD virus targets genetic signatures unique to Neethling vaccine strains, and the capripoxvirus assay targets the conserved P32 gene. Геном вируса представлен двуцепочечной ДНК длиной тыс. Quantification of lumpy skin disease virus following experimental infection in cattle.
Detection of vaccine-like lumpy skin disease virus in cattle and Musca domestica L. Все результаты, полученные с помощью предложенных нами тест-систем, подтверждены выделением вируса в чувствительной культуре клеток данные не представлены , что свидетельствует о надежности используемых методов ПЦР-РВ при дифференциации вакцинного штамма и полевого изолята. Alkhamis M. Journal of the South African Veterinary Association, , doi: Epidemiological study of lumpy skin disease outbreaks in North-western Iran. Sprygin A. В литературе есть несколько публикаций о методах для выявления геномов каприпоксвирусов, полевого или вакцинного штамма LSDV. Для амплификации участка генома полевых изолятов выбрали рамку считывания LSDV для гена EEV вируса нодулярного дерматита, в котором у других представителей семейства Capripoxviridae и вакцинных вирусов типа Neethling делетирован участок 27 п. Результаты генодиагностики нодулярного дерматита в Дагестане и Чеченской Республике — первое официальное подтверждение болезни на территории Российской Федерации. Для оценки вариабельности значений порогового цикла один образец тестировали 3 раза в 5-кратной повторности 1 запуск — 5 повторений на протяжении 3 сут. Зона отжига зонда для выявления полевых изолятов вируса заразного узелкового дерматита крупного рогатого скота А , вакцинных штаммов этого вируса Б и каприпоксвирусов В в ПЦР-РВ см. Примененные нами праймеры и зонды кратко охарактеризованы в таблице 1. Эффективность, величина стандартного отклонения SD и коэффициент детерминированности r 2 тест-систем ПЦР-РВ для выявления и дифференциации полевых изолятов вируса заразного узелкового дерматита крупного рогатого скота, вакцинных штаммов этого вируса и каприпоксвирусов. Диагностическую чувствительность ДЧ и диагностическую специфичность ДС тест-систем проверяли на пробах крови и назальных смывах, которые получали от естественно зараженных животных.
Tropical Animal Health and Production , , 49 1 : doi: Acta Veterinaria Belgrade ,, 66 4 : doi: Stubbs S. Journal of Virological Methods ,, 2 : doi: Journal of the South African Veterinary Association, , doi: В этом сообщении впервые представлен разработанный комплекс тест-систем ПЦР-РВ, позволяющих одновременно выявлять геномы каприпоксвирусов, полевых изолятов вируса LSD и вакцинного штамма Neethling. Mayo, J.
Генетический материал вируса также выявлялся в тканях легких, лимфоузлов и в молоке, однако из-за ограниченного числа проб статистически оценить эти результаты однозначно пока нельзя. Все локусы для амплификации и сайты отжига зондов выбирались по критериям консервативности по всем изолятам, данные по которым доступны в GenBank и уникальности для обеспечения высокой специфичности см. Real-time PCR assays for the species detection of field Balkan strains of lumpy skin disease virus. Что касается оспы овец, то это заболевание регистрировалось, главным образом, на Дальнем Востоке и Северном Кавказе. Более того, высокая диагностическая чувствительность и специфичность при тестировании с панелью ДНК гомологичных и гетерологичных вирусов делает этот комплекс незаменимым в постановке диагноза при работе с пробами полевого материала. However, the increasing demand for livestock products drives animal population growth and risks for infection diseases. Lumpy skin disease: attempted propagation in tick cell lines and presence of viral DNA in field ticks collected from naturally-infected cattle. В нашем исследовании тест-системы работают независимо в разных пробирках в отличие от дуплекса, где из-за одновременного присутствия обоих вирусов чувствительность реакции снижается. Lumpy skin disease in cattle: frequency of occurrence in a dairy farm and a preliminary assessment of its possible impact on Egyptian buffaloes. Biometrics , , 45 1 : doi: Результаты интерпретировали по тому, пересекается или не пересекается кривая флуоресценции с пороговой линией, что соответствует наличию или отсутствию значения порогового цикла Ct. Follow-up report No. В этом сообщении впервые представлен разработанный комплекс тест-систем ПЦР-РВ, позволяющих одновременно выявлять геномы каприпоксвирусов, полевых изолятов вируса LSD и вакцинного штамма Neethling.
До года территория Российской Федерации была благополучна по ЗУД, однако из-за локальных конфликтов на Ближнем Востоке и изменений климата заболевание распространяется в северном направлении масштабные вспышки LSD в Турции, странах Балканского полуострова, ЕС и в России. Transboundary and Emerging Diseases , , 55 7 : doi: Genome of lumpy skin disease virus. В каждом запуске по 5 повторений. Для амплификации генома каприпоксвирусов был выбран ген P32 , консервативный для всех представителей семейства Capripoxviridae см. Необходимо отметить, что при отборе проб в случае подозрения на LSD должны учитываться и клинически здоровые животные, поскольку они могут быть скрытыми носителями вируса без видимых симптомов Elsevier Academic Press, San Diego, В году вспышку этого заболевания отмечали уже в Северо-Кавказском регионе России, а в годах — на территории Центрального федерального округа Спрыгин А. Эффективность амплификации см. Сельскохозяйственная биология , , 53 2 : doi:
Эти свойства, возможно, объясняют слабую трансмиссию вируса между животными при отсутствия лёта переносчиков. Важно отметить, что система ПЦР-NEE для тестирования вакцинного штамма, валидированная на таком же объеме материала, позволила выявить несколько случаев возможного нелегального использования вакцины против LSDV на основе штамма Neethling в ряде регионов России данные не представлены , хотя впервые геном вакцинного штамма Neethling был обнаружен в Республике Башкортостан у коров с клиническими признаками ЗУД КРС Примененные нами праймеры и зонды кратко охарактеризованы в таблице 1. Сельскохозяйственная биология , , 53 2 : doi: Вы точно человек? М, Зиняков Н. Инфекции крупного рогатого скота, вызываемые каприпоксвирусами, в частности вирусом заразного узелкового дерматита ЗУД, Lumpy skin disease, LSD , поражают крупный и мелкий рогатый скоту, нанося существенный экономический ущерб. Transboundary and Emerging Diseases , , 64 6 : doi: Пестова Я. Ball eds. In this paper we report the development of a set of one-run real-time PCR assays to detect and differentiate between Capripoxvirus genome, field and vaccine LSD virus genomes.
Using the assays reported here some samples obtained as part of national surveillance for LSD virus from animals exhibiting clinical signs consistent with LSDV turned out to be positive for vaccine LSD virus genome in Для вариантов ПЦР-РВ в литературе представлены работы по выявлению генома каприпоксвирусов 30 , полевых изолятов 31 , вакцинного и полевого штамма в формате дуплекс Duplex PCR, одновременное выявление двух генов-мишеней До года территория Российской Федерации была благополучна по ЗУД, однако из-за локальных конфликтов на Ближнем Востоке и изменений климата заболевание распространяется в северном направлении масштабные вспышки LSD в Турции, странах Балканского полуострова, ЕС и в России. Transboundary and Emerging Diseases , , 64 6 : doi: Experimental and Applied Acarology , , 62 1 : doi: The assays proved highly sensitive and specific. Описание тест-систем см.
М, Зиняков Н. Эти свойства, возможно, объясняют слабую трансмиссию вируса между животными при отсутствия лёта переносчиков. Validation of a high-throughput real-time polymerase chain reaction assay for the detection of capripoxviral DNA. Для оценки вариабельности значений порогового цикла один образец тестировали 3 раза в 5-кратной повторности 1 запуск — 5 повторений на протяжении 3 сут. The assays proved highly sensitive and specific. Experimental and Applied Acarology , , 62 1 : doi: Например, отсутствие генома вируса в большинстве проб смывов, в сыворотке крови и в цельной крови, вероятно, объясняется тем, что вирус еще не успел накопиться в достаточной количестве, чтобы при экскреции в биологические жидкости его концентрация превышала предел чувствительности тест-системы. При оценке специфичности мы использовали изоляты, циркулирующие на территории России, тогда как зарубежные коллеги оценивали специфичность на штаммах, выявленных за пределами нашей страны. Ключевые слова: заразный узелковый дерматит, нодулярный дерматит, вакцинный штамм, каприпоксвирус, ПЦР, Neethling. In: Virus taxonomy: classification and nomenclature of viruses. В, Кононов А.]
Vidanovic D. Capripoxvirus diseases: current status and opportunities for control. Babiuk S. Journal of the South African Veterinary Association, , doi: В нашем исследовании тест-системы работают независимо в разных пробирках в отличие от дуплекса, где из-за одновременного присутствия обоих вирусов чувствительность реакции снижается. Tropical Animal Health and Production, , 20 1 :